微生物检测易错 10 题：别让 “常识” 变成你的 “盲区”
微生物检测是食品、医药、环境等领域质量控制的 “守门人”，从业者每天与培养皿、移液器、生化反应管为伴，但那些习以为常的操作里，往往藏着容易被忽略的 “细节陷阱”。以下 10 道常识题，覆盖基础操作、标准解读、结果判定、仪器维护及应急处理等核心环节 ―― 不少从业 3 年的技术人员都曾在这些 “看似简单” 的题目上栽跟头。快来挑战一下，看看你能答对几道？
一、基础操作题
1. 单选题：配制固体培养基时，琼脂的加入量通常为（ ），且灭菌后应在（ ）内倒平板，以下选项正确的是？
A. 1%-1.5%；45-50℃
B. 2%-3%；50-55℃
C. 1%-1.5%；55-60℃
D. 2%-3%；45-50℃
2. 判断题：为提高效率，移液时可将移液器吸头伸入试剂瓶底部反复吹吸混匀液体。（ ）
二、标准理解题：
3. 单选题：根据 GB 4789.2-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》，培养菌落总数时，倾注用的营养琼脂培养基温度应控制在（ ），培养条件为（ ）？
A. 46℃±1℃；36℃±1℃培养 48h±2h
B. 45-50℃；37℃±1℃培养 24h±2h
C. 46℃±1℃；37℃±1℃培养 48h±2h
D. 50℃以下；36℃±1℃培养 24h±2h
4. 多选题：下列关于 “无菌操作” 的描述中，符合实验室规范的有（ ）？
A. 无菌操作前 30min 开启超净工作台紫外灯消毒
B. 佩戴无菌手套后，可直接接触超净工作台内壁
C. 接种环灭菌后，需冷却至室温再接触菌种
D. 无菌培养皿打开后，皿盖可倒扣在实验台面上
三、结果判断题：
5. 单选题：在进行大肠菌群 MPN 计数时，某样品 3 个稀释度（1:10、1:100、1:1000）的发酵管阳性结果为：1:10（3/3）、1:100（2/3）、1:1000（0/3），查 MPN 检索表对应的数值为（ ）？
A. 23 MPN/g(mL)
B. 30 MPN/g(mL)
C. 230 MPN/g(mL)
D. 300 MPN/g(mL)
6. 判断题：在霉菌和酵母菌计数时，培养皿中出现的黑色、圆形、表面光滑的菌落，可直接判定为霉菌菌落。（ ）
四、仪器使用题：
7. 单选题：使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，若灭菌物品为 “装有 500mL 培养基的三角瓶”，正确的灭菌参数为（ ）？
A. 121℃、103.4kPa、15min
B. 121℃、103.4kPa、30min
C. 115℃、68.9kPa、15min
D. 115℃、68.9kPa、30min
8. 判断题：移液器每次使用前都需进行校准，校准前应将移液器和校准用砝码在室温下平衡 30min 以上。（ ）
五、应急处理题：
9. 单选题：实验过程中，若不慎将含菌培养物洒落在超净工作台外的实验台面上，正确的处理步骤是（ ）？
A. 直接用抹布擦拭干净，再用 75% 酒精消毒台面
B. 先用含有效氯 1000mg/L 的消毒液覆盖浸泡 10min，再擦拭干净，最后用 75% 酒精消毒
C. 立即用酒精灯灼烧污染区域，再用湿布擦拭
D. 先将污染区域隔离，待实验结束后再处理
10. 多选题：下列关于 “培养基灭菌后不凝固” 的原因分析中，合理的有（ ）？
A. 琼脂添加量不足
B. 灭菌时间过长导致琼脂分解
C. 灭菌后冷却速度过快
D. 培养基 pH 值过低或过高
答案与解析汇总
一、基础操作题
1. 答案：A
解析：本题易错选 C 或 D，核心是混淆 “固体 / 半固体琼脂用量” 和 “倒平板温度范围”。琼脂作为凝固剂，常规固体培养基添加量为 1%-1.5%，2%-3% 为半固体培养基（如动力试验培养基）的标准用量，因此可直接排除 B、D；灭菌后的培养基需冷却至 45-50℃倒平板 ―― 温度过高会烫死后续接种的目标菌，过低则会提前凝固导致平板厚薄不均，故 A 正确。
2. 答案：错误
解析：这是实验室高频违规操作，风险点有二：一是吸头伸入瓶底时，外壁沾染的微生物、灰尘会直接污染整瓶试剂；二是反复吹吸易产生气溶胶，还可能导致移液器内部污染试剂。正确操作：吸头仅伸入液面下 1-2cm，缓慢吸液后在瓶壁轻靠去除多余液体，严禁吹吸混匀试剂瓶内原液。
二、标准理解题
3. 答案：A
解析：本题为 “标准细节辨析题”，易错选 C，关键是区分 “国标明确参数” 与 “其他领域常规条件”。新版国标强制规定：菌落总数测定时，倾注用培养基温度需严格控制在 46℃±1℃（建议用恒温水浴维持），培养条件为 36℃±1℃、48h±2h。需特别注意：化妆品、药品等领域的菌落总数培养常采用 37℃条件，但食品检测必须严格遵循 GB 4789.2-2022 要求，不可混淆。
4. 答案：ACD
解析：B 选项错误，超净工作台内壁为 “洁净区” 而非 “无菌区”，接触后会污染手套；A 选项正确，紫外灯消毒需提前 30min 开启，消毒后关闭并通风 10-15min 再操作，避免臭氧残留影响实验；C 选项正确，接种环灭菌后直接接触菌种会导致微生物被烫死，可通过接触空白培养基边缘判断冷却情况；D 选项正确，皿盖倒扣能防止台面污染物落入培养皿，是无菌操作的基础要求。
三、结果判断题
5. 答案：A
解析：本题易错选 C，核心是掌握 “MPN 检索表使用逻辑”。当阳性结果为 “3-2-0” 时，首先对应稀释倍数为 “10⁻¹、10⁻²、10⁻³”，检索表中该组合的基础 MPN 值为 23，再乘以 “最高稀释倍数的倒数”（即 10¹），最终结果为 23×1=23 MPN/g (mL)。很多人误将基础值 23 直接乘以 100（10²），导致结果扩大 10 倍，本质是忽略了 “稀释度与检索值的对应关系”。
6. 答案：错误
解析：仅凭肉眼形态判断易犯 “经验主义错误”。霉菌菌落典型特征为绒毛状、絮状或蜘蛛网状，虽颜色可能为黑色，但黑色、圆形光滑的菌落也可能是枯草芽孢杆菌老龄菌落或异常酵母菌落。正确判定方法：需结合显微镜观察 ―― 霉菌有明显的菌丝和孢子结构，而细菌、酵母菌无菌丝，这是区分三者的关键依据。
四、仪器使用题
7. 答案：B
解析：本题易错选 A，核心是 “根据物品体积调整灭菌时间”。121℃、103.4kPa 是常规湿热灭菌的温度和压力，但灭菌时间需根据液体体积调整：50mL 以下小体积液体或固体物品可采用 15min，而500mL 等大体积液体需延长至 30min，确保容器中心温度达到 121℃，避免 “表面灭菌、内部未灭菌” 的隐患。C、D 选项的 115℃参数多用于含糖类、易分解成分的培养基，本题不适用。
8. 答案：错误
解析：本题易错点在 “校准频率”。移液器无需 “每次使用前” 校准，常规校准周期为 3-6 个月，仅在出现吸液滴漏、液面异常、摔碰等情况时需临时校准；但校准前的 “温度平衡” 步骤正确 ―― 需将移液器、砝码、蒸馏水在室温下放置 30min 以上，避免温度差异导致称量误差，影响校准精度。过度频繁校准不仅不必要，还可能因操作不当损伤移液器内部组件。
五、应急处理题
9. 答案：B
解析：A 选项直接擦拭会导致微生物扩散；C 选项灼烧仅适用于接种环等金属物品，无法消毒台面且可能损坏实验台；D 选项延迟处理会增加交叉污染风险。标准处理流程：第一步用高浓度消毒液（1000mg/L 含氯消毒液）覆盖污染区域，浸泡 10min 彻底杀灭微生物；第二步擦拭清除残留物；第三步用 75% 酒精二次消毒，去除消毒液残留，避免腐蚀台面。
10. 答案：ABD
解析：C 选项错误，冷却速度过快仅会导致培养基凝固不均匀（出现块状、气泡），但不会导致完全不凝固；A 选项，琼脂添加量低于 1% 时，无法形成稳定凝胶结构，必然不凝固；B 选项，长时间高温会使琼脂多糖链断裂，失去凝固能力，这是 “过度灭菌” 的常见后果；D 选项，pH 值＜5.0 或＞8.0 会破坏琼脂的胶体结构，导致凝固失败。实际操作中，需结合称量记录、灭菌参数和 pH 检测结果综合排查。
得分说明与总结
8-10 分：恭喜！你对微生物检测的细节把控精准，标准理解透彻，是实验室的 “可靠骨干”，继续保持严谨的操作习惯即可。
5-7 分：基础能力达标，但在标准细节、应急处理等环节仍有疏漏。建议重点研读对应领域国标（如食品 GB 4789 系列、医药 GMP 附录），多参与实操演练，强化 “按标准操作” 的意识。
0-4 分：需高度警惕！你的操作可能存在质量风险甚至安全隐患。建议重新系统学习《微生物实验室生物安全通用要求》（GB 19489）和《实验室操作规范》，从基础操作开始反复练习，必要时寻求资深技术人员指导。
