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细菌浓度测定,为何选择OD600?
2025-09-24  


一、OD与吸光度的关系


吸光度透光率在光谱学中是经常使用到的两个术语。


吸光度(Absorbance,简写Abs或A),常用A表示,是指光束通过被测样品时,被测样品对光的吸收量


透光率(Transmittance,缩写Tra或T),常用T%表示,相对吸光度说的,是指光束通过被测样品时,有一部分光被样品吸收,穿透过的光的强度(P)和入射光的强度(P0)比值就是透光率,那么T=P/P0。


有人可能要问了,是不是A+P=P0,不是的,入射光中也有一部分因反射和散射而丢失的能量,那部分不在我们考虑范围内。


吸光度和透光率的关系用公式表示为:


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其中,A是吸光度,T是透光率。


从公式中可以看出,吸光度和透光率是一一对应关系,吸光度越高,那么透光率越低,反之,吸光度越低,透光率越高。


OD呢?


OD(optical density,缩写为OD),称光密度,此时也就是吸光度,在实际应用中,因为吸光度是物质对光的吸收量,习惯性用吸光度表达。所以,此时OD就是上述公式中的A。





三、为什么是600nm,不是500nm和700nm?


OD600是指将分光光度计的波长设定为600nm时,测定的光密度值,是微生物发酵过程中常用的生物量测定方法之一,可以间接反映发酵液菌体浓度。OD600越高,菌液中细胞数量越多,反之,细胞数量越少。


那么,为什么要将分光光度计的波长设定为600nm来测定微生物发酵液中的OD值呢?


分光光度计在波长600nm处对浊度的反应比较灵敏,所以,一般用波长600nm测定





四、OD600可以测菌液浓度?


OD600正比于菌液浓度,OD值越高菌液浓度越高,OD值越低菌液浓度越低,他们成关系正相关,而不是线性关系。


在平常试验中,我们总想复杂问题简单化,简单问题更简单化,其实OD值和菌液浓度的关系一直也是比较关注的一个焦点,为什么呢?


因为测OD值只需要用分光光度法度数就行,最多稀释个倍数,不用一分钟肯定出结果,但菌液浓度可不一样,菌液浓度是指一定体积内某生物细胞或个体的数量,也就是活菌数(CFU/mL,菌落形成单位/mL),如何测定?


总之,没一个简单的。相对来说,血球计数板计数最简单,但也比测OD值麻烦。


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