1、微生物检测中，无菌操作的核心目的是什么？
A. 加快实验速度
B. 防止杂菌污染样品
C. 节省实验材料
D. 提高培养温度
2、下列哪种培养基常用于分离肠道致病菌？
A. 营养琼脂培养基
B. 麦康凯培养基
C. 沙氏培养基
D. 血琼脂培养基
3、高压蒸汽灭菌的标准条件是：
A. 100℃, 15分钟
B. 121℃, 15分钟
C. 160℃, 2小时
D. 180℃, 30分钟
4、革兰氏染色中，关键区分步骤是：
A. 初染（结晶紫）
B. 媒染（碘液）
C. 脱色（乙醇）
D. 复染（番红）
5、检测水中总大肠菌群时，最常用方法是：
A. PCR扩增
B. 多管发酵法
C. 酶联免疫吸附试验
D. 基因测序
二、多选题（每题6分，共18分）
6、微生物限度检查的项目包括（多选）：
A. 需氧菌总数
B. 霉菌和酵母菌总数
C. 控制菌（如大肠埃希菌）
D. 病毒载量
7、下列仪器中，用于微生物快速检测的有（多选）：
A. 实时荧光定量PCR仪
B. 全自动微生物鉴定系统
C. 普通光学显微镜
D. ELISA检测仪
8、关于细菌内毒素检测，描述正确的有（多选）：
A. 使用鲎试剂（LAL）检测
B. 主要针对革兰氏阴性菌
C. 实验需在无菌环境中操作
D. 结果单位为EU（内毒素单位）
三、判断题（每题3分，共15分）
9、紫外线灭菌适用于不耐热塑料培养皿的表面消毒。 （ ）
10、倾注平板法既能用于菌落计数，也能用于分离纯化微生物。 （ ）
11、微生物检测中，所有样品均需在4℃冷藏保存以防止腐败。 （ ）
12、革兰氏阳性菌因细胞壁肽聚糖层厚，被染成红色。 （ ）
13、PCR技术可直接检测微生物的活性状态。 （ ）
四、简答题（每题10分，共20分）
14、简述无菌操作台（超净工作台）的使用规范（至少3点）。
15、为何微生物检测结果需报告为“CFU/g（或CFU/mL）”？解释"CFU"的定义及意义。
五、综合题（27分）
16、某食品工厂需检测一批罐头样品的商业无菌：
(1) 列出3项关键检测步骤（9分）；
(2) 若发现罐头胀罐且pH升高，可能是什么微生物污染？说明依据（9分）；
(3) 如何通过镜检初步判断污染菌类型？（9分）
答案解析
B
解析：无菌操作的核心是避免环境微生物污染样品或培养基，确保结果准确性。
B
解析：麦康凯培养基含胆盐和乳糖，可抑制革兰氏阳性菌，促进肠道菌生长（如大肠杆菌呈红色菌落）。
B
解析：121℃、103.4 kPa高压蒸汽维持15分钟可杀灭所有微生物（包括芽孢），是灭菌金标准。
C
解析：脱色是区分革兰氏阳性菌（保留结晶紫）和阴性菌（脱去紫色）的关键步骤。
B
解析：多管发酵法是经典方法，通过产气与产酸现象判断是否含大肠菌群，操作成本低且可靠。
A, B, C
解析：微生物限度检查针对非无菌产品，包括需氧菌、霉菌/酵母菌总数及控制菌（如金葡菌、沙门氏菌），病毒检测不属常规项目。
A, B, D
解析：实时PCR（快速核酸扩增）、微生物鉴定系统（生化反应分析）和ELISA（抗原抗体检测）均可缩短检测时间。普通显微镜主要用于形态观察。
A, B, C, D
解析：内毒素为革兰氏阴性菌细胞壁成分，用鲎试剂检测（灵敏度高），操作需无菌避免干扰，结果以EU定量。
✓
解析：紫外线通过破坏DNA杀菌，适用于光滑物体表面，但对阴影处无效。
✓
解析：倾注法将样品与熔融琼脂混合，冷却后菌落分布在培养基内部及表面，兼具计数和分离功能。
✗
解析：部分样品（如冷冻食品）需-20℃保存，冷藏可能导致嗜冷菌生长干扰结果。
✗
解析：革兰氏阳性菌染成紫色（保留结晶紫），阴性菌被乙醇脱色后复染成红色。
✗
解析：PCR检测微生物核酸（DNA/RNA），无法区分死菌与活菌，需结合培养法判断活性。
答案要点：
评分：答对3点即满分。
开启紫外灯灭菌30分钟；
操作前用75%乙醇擦拭台面及手部；
物品摆放需避免气流阻挡；
操作中减少手臂频繁进出（防止空气扰动）。
答案要点：
CFU（Colony-Forming Unit）：菌落形成单位，表示样品中可增殖的活微生物数量。
意义：因微生物可能成团或链状存在，1个菌落未必对应1个菌体，故用CFU更科学反映实际存活单元数量。
答案要点：
(1) 关键步骤：
保温试验（37℃或55℃培养观察胀罐）；
开罐后pH测定与感官检查；
涂片镜检及需氧/厌氧培养验证。
(2) 污染菌推测：
梭菌属（如产气荚膜梭菌），依据：胀罐（产气）、pH升高（分解蛋白质产胺类碱性物质）。
(3) 镜检判断：
革兰氏染色：阳性杆菌（梭菌）或阴性杆菌（其他腐败菌）；
观察芽孢（梭菌芽孢常位于菌体中央/末端）。
