1. 仪器校准：别让"跑偏"的波长毁了你的数据！

紫外分光光度计的波长校准是实验的第一步，但很多人只是"例行公事"地做一下，结果测出来的吸收峰位置偏差，导致定性定量全错！

关键操作：

・ 波长校准：温度变化会导致仪器机械部件微调，波长可能"跑偏"。除了定期全面校准外，每次测定前都要用标准物质（如氘灯或氧化钬滤光片）校正波长，确保误差在±1nm以内。

・ 吸光度校准：用重铬酸钾的硫酸溶液（0.005 mol/L）检查吸光度准确度，确保仪器响应线性。

・ 狭缝宽度：大部分药典方法用2nm缝宽，但像青霉素钾/钠这样的特殊品种，必须用1nm或更窄，否则264nm处的吸光度会偏低。

小贴士： 开机后至少预热15分钟，待仪器稳定后再测，否则数据波动大。

2. 吸收池配对：你以为的"空白"可能并不空白！

石英吸收池在紫外区（220~270nm）也有吸收，而且每个池子的透光率可能不同。如果直接拿来就用，测出来的吸光度可能包含池子本身的误差！

关键操作：

配对实验：所有吸收池装入空白溶剂，以其中一个为参比，测定其他池子的吸光度，选吸光度最小的配对使用。

使用技巧：手指只能捏毛玻璃面，透光面用擦镜纸由上至下擦拭，避免指纹或溶剂残留影响透光。

清洗方法：普通污染用水或乙醇洗，顽固污渍用发烟硫酸+硝酸（3:1）浸泡，但千万别用铬酸洗液长时间泡，否则会腐蚀光学表面。

避坑指南： 测挥发性溶液时记得加盖，否则溶剂挥发后溶质会残留在池壁上，导致下次测定误差。

3. 溶剂选择：用错溶剂，吸收峰直接"位移"！

溶剂可不是随便选的！极性溶剂（如水、乙醇）可能让溶质的吸收峰发生红移或蓝移，尤其是含氢键的化合物。

关键操作：

溶剂空白检查：在测定波长附近扫描溶剂，确保无干扰吸收峰。

批次一致性：同一实验尽量用同一厂家、同一批号的溶剂，避免因纯度差异导致数据波动。

典型案例： 某实验室用不同批次的甲醇测某药物含量，结果偏差超5%，最后发现是溶剂杂质干扰。

4. 样品测定：吸光度不在这个范围，误差翻倍！

药典规定，供试品溶液的吸光度最好在0.3~0.7之间，此时仪器误差最小。超出这个范围，数据可信度直线下降。

关键操作：

浓度调整：若吸光度过高，适当稀释；过低则浓缩或换光程更长的吸收池。

平行实验：含量测定需称取2份样品，对照品比较法也要2份对照品，平行操作，偏差应≤±0.5%。

关键点： 在最大吸收峰±2nm内多测几个点，确认峰位是否正确。若偏离药典规定波长±1nm以上，可能样品不纯或仪器有问题。

5. 环境控制：温湿度没管好，仪器寿命减半！

关键要求：

温度：建议实验室维持在5~30°C，南方地区务必配空调，避免光学元件受热变形。

湿度：超过75%会导致光栅、反射镜铝膜锈蚀，产生杂散光，数据漂移。

防尘：定期清洁样品室，避免灰尘堆积影响光路。

紫外分光光度法看似简单但细节决定成败！从仪器校准到环境控制，每一步都可能成为"误差放大器"。