三、碱变性法: 取血清20ul，加入1mol/L NaOH 20ul，37℃30min，离心，加 1mol/L HCl 20ul，离心后，取上清5ul，用于PCR扩增。*亦有用10ul血清加NaOH至 0.2mol/L，37℃1h，再加HCL中和离心后取上清10ul做PCR，其特异性和敏感性较前法 更好。
四、煮沸法: 经离心洗涤过的组织细胞，分泌物及血液标本，加适量无菌蒸馏水或PBS，混匀 后，100℃煮沸10～15min，14000r/min 10min，取上清做PCR.
五、碘化钠法: 取组织细胞及抗凝血液10～100ul，加等体积的6MNaI，反复轻混 20s，加等体积:(49:1)振匀后，离心取上清加0.6体积的异丙醇，混匀后 置室温3min.14000r/min 10min，沉淀加10～100ul，TE溶解，取5～10ul做PCR，亦有 用100ul血清加裂解液300ul(6M NaI，0.5%十二烷基肌酸钠，10ug糖原，26mmol/L pH8.0 Tris-HCL，13mmol/LEDTA)混匀后，60℃15min，加等体积异丙醇，离心沉定 后，加TE液用于PCR扩增，其产量和质量较高。
六、异硫氰酸胍法
此法主要用于RNA的提取。标本为组织细胞及血清等。
1、异硫氰酸胍消化液
异硫氰酸胍4mol/L
柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L
十二烷基肌酸钠0.5%
β-巯基乙醇0.1mol/L
2、消化方法: 用50～100ul细胞悬液及血清，加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀 后，或65℃1小时，或室温放置数分钟，然后加1/10体积的3mmol/L pH5.2的醋酸钠缓 冲液，再加等体积的酚:，用力振摇约10s，10000r/min，离心5min，取上清加等 体积异丙醇-20℃放置3h后，14000r/min离心15min，沉定用75%冰冷乙醇离心洗涤1～ 2次，真空干燥，沉淀用TE缓冲液溶解即可用于逆转录PCR扩增，或放-20℃保存。
其它消化处理标本提模板核酸的方法有①异硫氰酸胍一二氧化硅法②异硫氰酸胍-玻璃粉法。③Chelex-100法。④全血直接扩增法⑤尿素消化裂解法。各有千秋，可根据情况选用。
PCR实验中的核酸提取方法（下）
2025-11-21 来源：网络
