4. 扩增产物出现多条带 （杂带）

（1）引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

（2）循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。

（3）酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。

（4）退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。

（5）样品处理不当。

（6）Mg²⁺浓度偏高，因适当调整Mg²⁺使用浓度。

（7）若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。

（8）复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。

（9）反应缓冲液未全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化全并彻底混匀。

（10）引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

（11）引物量过多。减少反应体系中引物的用量。

（12）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。

（13）外源DNA污染。确保操作的洁净。