汇聚行业网友见解，传递微生物检测知识，本次列出的问题均是微生物实验基础操作常见问题，食品微生物检测小编咨询专家老师后汇编，希望可以帮助朋友们对于实验室日常检测问题有个新的理解。大家感兴趣的、比较关注的问题，也可以后台留言或直接微我，我们一起交流探讨！

请问下，营养琼脂可以做环境监测吗？之前用大豆酪蛋白测，这个和大豆酪蛋白效果有差距吗？

有差距，建议用用TSA，如果没有法规要求，NA也能拿来作为环境监测的培养基。

 

请教一下霉菌培养皿长在培养基里面的是厌氧菌吗？

培养基里面的菌是需氧菌或者兼性厌氧菌，空气在琼脂培养基中有一定溶解度，能满足一般菌生长需要，但不能培养严格厌氧菌；霉菌是好氧菌，长在里面的可能是酵母，挑出来染色镜检

 

固体样品稀释倍数递进能取1ml到9ml里吗？

固体样品稀释当然可以取1ml到9ml。课件里是指当液体样品原液取样1mL之后, 要做第一个10倍梯度稀释时要取25mL加入225mL，后面的梯度就按1ml到9ml。

 

一次性牙签的大肠菌群和霉菌，应该如何

制样检测？

按照木牙签国家标准（LY/T 1159-2006）中的相关规定，依照GB 14934-2016消毒餐（饮）具 进行制样，即棉签擦拭法50cm2，按GB 4789.3-2016 大肠菌群计数MPN法检测。按GB 4789.15-2016 霉菌和酵母计数，即称量25g+225mL稀释液均质后进行霉菌检测。

 

标准储存菌株可以传代储存菌株，再由储存菌株变成工作菌株？

标准储备菌株和储备菌株一样，都是后代，只不过一个是第一代。所以标准储备菌株也是储备菌株，也一样可以拿去当工作菌株

 

采样用镊子和无菌盘都是用什么办法灭菌的呢？

灭菌条件是什么？

金属材质等耐高温器皿首先采用高温干热灭菌，160℃，2h

菌种每次传代都需要做鉴定吗？

每批次按照方法验收一下，可以加一些项目 比如纯度检查（革兰氏染色镜检看菌体的一致性，以及划线分离后看看平板上是一种形态的菌还是几种（大部分细菌出现2种以上菌落形态可能是污染的，也有少部分同1种菌出现不同的形态）。

工作菌种保存的问题，一般冷冻到零下70℃能保存多久？

工作菌株 1批次放斜面管里 可以保存1-2个月（冷藏就好了，个别菌不能冷藏那就室温保存）自己规定1个月还是2个月，到期销毁，做好记录；冷冻保存的甘油管 不要长期冷藏保存，否则菌会死掉  甘油管不适合冷藏；-80℃下一般细菌能放5年没问题的

如何辨别培养基细小的点是不是细菌？是不是延长培养时间菌落就一定会变大？

依据样品是什么而定，下次冰箱保存一个刚稀释的样品做对照；TTC，是化妆品安全技术规范方法允许的，识别菌落方便。

 

看形状看凸起：通常菌落呈现圆形规则外观、突出于培养基琼脂平面的，而样品渣滓不定形、凹陷于琼脂内。

 

看增殖：作好标记继续培养，菌落会有扩张。培养前提前拍照，与培养后的对照。接种时多接种一份平板，放4℃冰箱冷藏而不培养，用于与培养后的平板对照。

 

染色镜检：挑取可疑物，涂片子镜检观察是否是菌。

速冻生制品（非即食的生制品）是否需要出厂检测微生物？19295-2021中说非即食没说要求检测微生物，速冻食品生产许可证审查细则要求出厂检测微生物？

菌落总数与大肠菌群指标实际上属于指示菌指标，即其是食品生产过程卫生控制水平的表征；所以无论出厂及型式检验项目中是否设定相应指标，均有必要作为监测项目；出厂检验按照你执行的标准来操作，生产许可证办理按照审核细则来检测。

冷冻食品，需要怎么解冻呢？

45℃以下不超过15min,或2-5℃以下不超过18小时解冻。条件满足可以

像PCA、孟加拉红这类的培养基需要加热煮沸后再灭菌，只需要煮沸一次就可以了吗？VRBA也是只需要煮沸一次吗？

需要高压锅灭菌的PCA、孟加拉红，只需加热帮助达到溶解，形成均匀液体，入锅灭菌。而VRBA，是煮沸灭菌，看标准的配制方法，要保持沸腾2min 。

 

      标准菌株的用途？

1：制备人工污染样品；2：验收培养基，培养基做成了平板，有些是选择性的，某种菌在上面有特殊的形态。所以菌选择了培养基，培养基也选择了菌；3：培训新人方面。让其了解什么培养基上面菌是什么样子的；4：验收生化试剂。和培养基差不多，也是有特征反应。5：实验时候做质量控制。已知菌在某培养基或生化上面“应该”某种现象（概率），做出来后（事件）是，那就没问题，做出来后（事件）现象不对，那么就可以反推是不是哪里出了问题，包括菌是不是原来的菌，大胆假设怀疑，小心求证找到原因。提高自己。

      微生物检测各种菌，是否要做不确定度和回收率？

要做 依据RB/T 151-2016 食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南和SN/T 4091-2015 食品微生物学测量不确定度评估指南

      平板计数琼脂和营养琼脂都是用来测菌落的，是不是买哪一个都可以呀？

要看你用的国标是哪一版的，不同的国标用的培养基是不同的， 营养琼脂和平板计数琼脂营养成分不一样，你要看你们执行标准后面有培养基的成分要求，可以按照这个执行要求来选择培养基，一般4789.2都是用平板计数琼脂

     食品车间的环境空气沉降菌和食品接触面的微生物指标，有人知道是参考哪个标准吗？

参考GB15975和GBT16294两个标准，具体数值要通过检测静态和动态的数据后看看产品合格时其数值大概范围是多少。

     培养基检查和方法适用性检查怎么体现在实验记录中？

这两个适用性不放在日常检验记录里，要单独起草培养基适用性记录和方法适用性方案和报告。

     一次性的接种环分区划线每次分区都需要更换一根吗？

不需要更换，划完一区后可以将接种环插进培养基以减少环上的菌，然后再继续划后面的区。

 

       单增李斯特菌的翻转运动，用1600倍能看到吗？具体详细做法怎么做？

 

可以看到。将细菌悬液滴于盖玻片（四周先涂上少量凡士林）中央，将凹玻片的凹窝对准盖玻片中央的菌液盖下，翻转，镜检。由于细菌不受盖玻片的压力影响，所以此法常用于观察区别细菌运动的方式。100倍油镜下观察。

 

 

      菌落计数如结果是连续三个稀释度的结果是351、368、36、29、4、5，如何计数？

取在30-300范围内的计数，本例（36+29）/2=32.5, 假设，连续三个梯度分别是10倍、100倍、1000倍，结果报告为3300。