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微生物检测中 “稀释液” 如何选择
2025-08-22  来源:网络
 在微生物检测中,样品稀释是获取准确结果的基础步骤。稀释液的选择直接影响微生物的存活、分散和计数准确性。生理盐水(0.85% NaCl)、磷酸盐缓冲液(PBS)和含保护成分的缓冲液(如缓冲蛋白胨水)是三种常用选择,它们的特性和适用场景大不相同。




核心差异:成分决定功能


1.生理盐水 (0.85% NaCl)


优点:成分极简(仅氯化钠)、成本低、易配制、提供基本渗透压保护。


致命缺点无缓冲能力。稀释酸性(如果汁)、碱性或含缓冲物质(如土壤、食品)样品时,pH值剧烈波动,极易杀死对pH敏感的微生物(多数细菌在pH<5或>9时严重受抑)。


适用场景:仅推荐用于pH接近中性、无抑制剂、渗透压正常的简单样品(如部分临床尿液、分泌物常规计数)。不推荐作为食品、环境等复杂样品的通用稀释液。





2.磷酸盐缓冲液 (PBS)


优点


缓冲能力:核心优势。磷酸盐缓冲对(pH 7.2-7.4)能有效抵抗稀释带来的pH变化,显著提高微生物(尤其革兰氏阴性菌)存活率。


提供等渗环境(含NaCl)。


配制较简单,成本适中。


缺点:缓冲能力在中性附近最佳,对极强酸/碱样品(pH<4.5或>8.5)可能不足;不含营养或保护剂,无法中和消毒剂等抑制剂。


适用场景是最常用、推荐的通用稀释液。 广泛适用于:


食品(菌落总数、大肠菌群)


水质(总大肠菌群)


环境样品(土壤、空气沉降物初步稀释)


常规临床样本(非血液)


任何需要稳定pH的微生物稀释操作。





3.含保护成分的缓冲液 (如缓冲蛋白胨水-BPW, 0.1%蛋白胨水, 含中和剂缓冲液)


优点综合保护能力最强


缓冲基础:维持pH稳定。


营养支持 (如蛋白胨):为受损细胞提供能量修复,延长存活,促进复苏,减少假阴性。


保护/中和:添加物可中和消毒剂(如卵磷脂-吐温80中和季铵盐)、螯合重金属、或添加表面活性剂(如吐温80)帮助分散菌团。


缺点:成分复杂,配制繁琐,成本高;含营养可能致微生物缓慢增殖(影响计数);特定成分可能干扰后续检测(如PCR)。


适用场景:处理挑战性样品的首选:


含抑制剂样品:食品(防腐剂、酸)、化妆品、水(余氯)、环境(农药、重金属)。


含受损/应激微生物样品:经加热、冷冻、辐照、消毒处理后的检测。


需长时间稀释操作的样品。


标准方法强制要求:如沙门氏菌前增菌常用BPW (ISO/GB 4789.4),环境监测常用含中和剂的稀释液。

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