液体样品可直接取原液进行检验；固体或者半固体则必须依据检验经验，选取1-3个适宜稀释度进行检验（一般样品选取1:10,1:100,1:1000三个稀释度进行检验。若遇到不常做的样品，可适当延长稀释度至1：10000甚至更大）。
分别吸取1mL灭菌生理盐水到平皿中做空白对照，若空白有菌落生长则该实验无效。
根据对样品污染情况的估计，若样品有表面蔓延生长的可能性，则待第一次倾注的琼脂凝固后，可在表面再覆盖一层琼脂以避免菌落蔓延而难以计数。
本标准的难点在于菌落计数及计算。
1）菌落计数时，从低稀释度的平板开始计数。若所有平板上的菌落数均小于30CFU，则需计数所有平板上的菌落数，但仅采用最接近30CFU的两个平板的菌落数来计算最终菌落数。
2）当第一稀释梯度一个板上菌落数高于30，另一个低于30，则依据标准应当以介于30-300之间的菌落数作为该稀释梯度的菌落数。
3）若所有平板上的菌落数均大于30CFU，则只计数30-300CFU之间的平板上的菌落数，并采用这些数据，依据标准中给出的公式，进行最终菌落总数的计算，此时将大于300CFU的记为“多不可计”，以TNTC表示。
4）若所有稀释度的平均菌落数都大于300，则不能所有都记为TNTC，必须将最高稀释度的两个平板上的菌落数逐一的计数，再计算平均数，该平均数为该梯度的菌落总数，其余平板上的菌落数可记为TNTC。
5）若所有平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数。
注意：对于该情况，一直存在争议，不同的检验人员可能做法不一，有人保留为5CFU，有人保留为10CFU，并无固定做法，建议实验室保持一贯做法，不要随意更改。
