食品伙伴网
知识堂
如何计数大肠菌群
答案列表
什么标准啊?标准里都写的很详细啊
大肠菌群的计数有两种方式平板计数法和MPN法

1)平板计数法 VRBA 深红色菌落直径〉0.5mm,有胆盐沉淀环。BGLB产气

2)MPN法  LST产气,BGLB产气(48小时内,36度)
总大肠菌群的测定

一、     测定方法

 滤膜法

二、     方法依据

《生活饮用水卫生规范》(2001)

三、     测定范围 

生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定

四、     测定原理

用孔径为0.45µm的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在选择性培养基上,经培养后,计数生长在滤膜上的典型大肠菌群落数。

五、     试剂

1、品红亚硫酸钠培养基

1.1成份

A蛋白胨                     10g

B酵母浸膏                    5g

C牛肉膏                      5g

D乳糖                       10g

E琼脂                    15~20g

F磷酸氢二钾                 3.5g

G无水亚硫酸钠             5g左右

H碱性品红乙醇溶液(50g/L)   20mL

I蒸馏水                    1000mL

1.2储备培养基的准备

先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另500mL蒸馏水中加入磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补足蒸馏水至1000mL,混匀后调pH为7.2~7.4,再加入乳糖,分装,115℃高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。

1.3平皿培养基的配制

将上法制备的储备培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以灭菌。

用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止,将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿内。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡粉色变成深红色,则不能再用。

2. 乳糖蛋白胨培养液,同作业指导书(一)

六、     仪器设备

1. 滤器

2. 滤膜,孔径0.45~0.65µm.直径根据滤器规格,目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。

3. 抽滤设备

4. 无齿镊子

5. 其他仪器同作业指导书(一)

七、     分析步骤

1、准备工作

1.1滤膜灭菌:将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置于沸水浴中煮沸灭菌三次,每次15min。前两次煮沸后需换水洗涤2~3次,以除去残留溶剂。

1.2滤器灭菌:用点燃的酒精棉球,火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。

2、过滤水样

用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,将100mL水样(如水样含菌数较多,可减少过滤水样量,或将水样稀释)注入滤器中,打开滤器阀门,在负0.5大气压下抽滤。

3、培养

水样滤完后,再抽气约5s,并上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放在品红亚硫酸钠培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入37℃恒温箱内培养22~24h。

八、     计算

挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。

紫红色,具有金属光泽的菌落。

深红色,不带或略带金属光泽的菌落。

淡红色,中心色较深的菌落。

1、凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液,于37℃培养24h,有产酸产气者,则判定为总大肠菌群阳性。      2、计算滤膜上生长的总大肠菌群数,以每100mL水样中的总大肠菌群数报告之(CFU/100mL)。                           

总大肠菌群菌落数(CFU/100mL)=数出的总大肠菌群菌落数×100 /过滤的水样体积(mL)
不同的检测方法其判定标准有所不同,要参照标准检测方法提供的判定标准来判定结果。
复发酵产酸产气的管数,查MPN表即可。
请参考标准GB/T 4789.3-2003和SN 0169-1992标准上写得很清楚

可以使用发酵管推算MPN值,也可以使用固体琼脂平板计数

相关标准可以去标准库里下载

http://www.foodmate.net/standard/



另外也可以考虑使用3M的计数片



如果是结果判定中有疑问,请具体说明。
网站首页 | 关于我们 | 联系方式 | 网页版
©2008- 2021 食品伙伴网 All Rights Reserved
鲁ICP备14027462号-1
联系电话:0535-6730582